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安捷伦G1600AX 毛细管电泳仪

1
毛细管电泳仪概述

皇冠篮球比分网MAOXIGUANDIANYONG(capillary electrophoresis,CE)YOUCHENGGAOXIAOMAOXIGUANDIANYONG(high performance capillary electrophoresisHPCE) SHIYILEIYIMAOXIGUANWEIFENLITONGDAO、YIGAOYAZHILIUDIANCHANGWEIQUDONGLIDEXINXINGYEXIANGFENLIJISHU。MAOXIGUANDIANYONGSHIJISHANGBAOHANDIANYONG、SEPUJIQIJIAOCHANEIRONG,TASHIFENXIHUAXUEDEYICONGWEISHENGSHUIPINGJINRUNASHENGSHUIPING,BINGKEJINXINGDANXIBAOFENXI,NAIDANFENZIFENXI。 GAOXIAOMAOXIGUANDIANYONGZAIJISHUSHANGCAIQULELIANGXIANGZHONGYAOGAIJIN: CAIYONGLE25-100μmNEIJINGDEMAOXIGUAN; CAIYONGLEGAODASHUQIANFUDEDIANYA。 MAOXIGUANDECAIYONGSHICHANSHENGDERELIANGNENGGOUJIAOKUAISANFA,DADAJIANXIAOLEWENDUXIAOYING,SHIDIANCHANGDIANYAKEYIHENGAO。 DIANYASHENGGAO,DIANCHANGTUIDONGLIDA,YOUKEJINYIBUSHIZHUJINGBIANXIAO,ZHUZHANGZENGJIA, MAOXIGUANDIANYONGDEZHUXIAOYUANGAOYUHPLC,LILUNTABANSHUGAODAJISHIWANKUAI/MI MAOXIGUANDIANYONG(CE)JIBENYUANLI DIANYONGSHIZHIDAIDIANLIZIZAIDIANCHANGZHONGDEDINGXIANGYIDONG,BUTONGLIZIJUYOUBUTONGDEQIANYISUDU,QIANYISUDUYUNAXIEYINSUYOUGUAN? DANGDAIDIANLIZIYISUDUν ZAIDIANCHANGZHONGYIDONGSHI,SHOUDAODAXIAOXIANGDENG、FANGXIANGXIANGFANDEDIANCHANGTUIDONGLIHEPINGDONGMOCAZULIDEZUOYONG。 DIANCHANGLI:FE = qE ZU LI:F = fν GU: qE = fν q—LIZISUODAIDEYOUXIAODIANHE; E —DIANCHANGQIANGDU; ν—LIZIZAIDIANCHANGZHONGDEQIANYISUDU; f —PINGDONGMOCAXISHU ( DUIYUQIUXINGLIZI: f =6πηγ;γ —LIZIDEBIAOGUANYETAIDONGLIXUEBANJING;η —JIEZHIDEZHANDU; )  

 

     毛细管电泳又称高效毛细管电泳(HPCE) ,近年发展起
来的一项新型分析技术,兼有电泳和色谱技术的双重优点。
以高压电场为驱动力,以毛细管为分离通道,依据样品中各组
分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的液相微分离技
术。利用CE检测地高辛,是将酶促反应产物(NADH) 、剩余
物(NAD + )和内标物在电运动的作用下,注入聚丙烯酰胺电
泳毛细管,然后在电场强度作用下根据它们各自分离系数的
不同再将其分离,对发生溶血、高脂血症、黄疸的血清样本地
高辛浓度分析有一定优势[ 19 ]。毛细管电泳技术以高效、高
速、高灵敏度、高自动化以及样品和试剂耗用量少等一系列优
点,广泛应用于药物研究和分析之中。

    CESUOYONGDESHIYINGMAOXIGUANZHU,ZAIpH>3SHI,SHIYINGMAOXIGUANBISHANGDEGUICHUNJI(— SiOH)ZAISHUIRONGYEZHONGFASHENGDIANLI,CHANSHENGDESiOˉFULIZISHIMAOXIGUANBINEIBIAOMIANDAIFUDIAN,HERONGYEJIECHUSHIXIANGYINGDEHUANCHONGYEDAIZHENGDIAN,XINGCHENGLESHUANGDIANCENG。

皇冠篮球比分网 MAOXIGUANZHUSHICEDEHEXINBUJIAN,MUQIANDUOWEI25~75μmZHIJIAN,CAILIAOWEIJUSIFUYIXI、BOLIHEDANXINGSHIYING,YISHIYINGJUDUO。

XUANZEXINEIJINGMAOXIGUANZHUYOULIYUZUIDASANRE,DANBIBIAOMIANJIDA,HUIZENGJIARONGZHIDEXIFUZUOYONG。  

 YUHPLCXIANGBI,CEDETEDIANSHI:

(1)FENXISUDUKUAI,ZHUXIAOGAO; 

 (2)JIHUBUXIAOHAORONGJI,YANGPINYONGLIANGXIAO;  

 (3)QIANCHULIJIANDAN,SHENZHIWUXUQIANCHULI;    

 (4)KEZIYOUXUANZEBEIFENLIWUZHIDELEIXING,SHI TUPUQINGXI  

 (5)MAOXIGUANRONGYIQINGXI,BURONGYICHANSHENGZHUWURAN

 CEYECUNZAIXUDUOBUZUZHICHU:  

皇冠篮球比分网(1)LINGMINDUHEXIANXINGFANWEIBURUHPLC  

(2)JINNENGGOUSHIXIANWEILIANGZHIBEI

 (3)DINGLIANGJINGMIDUSHAODIYUHPLC

皇冠篮球比分网 YINGYONG: 

◆  LIZIFENXI

◆  TINEIYAOWUFENXI

皇冠篮球比分网◆  ZHONGYAOFENXI

◆  SHOUXINGCHAIFEN

皇冠篮球比分网 ◆  DANBAIZHI、DUOTAI、ANJISUANFENXI

皇冠篮球比分网◆  DNA、RNAFENXI

皇冠篮球比分网◆  KANGSHENGSU、WEISHENGSU、TANGLEI、DANXIBAOFENXI

 

2
仪器介绍

皇冠篮球比分网Agilent G1600A,HP/Agilent 3DCE systemMAOXIGUANDIANYONG (CE) WEIDAIDIANWUZHI,BIRUSHENGWUFENZI、XIAOFENZIJIANXINGHUOSUANXINGYAOWUHELIZITIGONGKUAISUFENLI、CHUSEDEXIAOLVHEFENLIDU,ERZHEIXIEFENLISHIYONG HPLC CHANGCHANGNANYISHIXIAN。CE HAISHIYONGYUYANGPINLIANGFEICHANGYOUXIANDEFENLIYINGYONG,SUOXUYAODEHUANCHONGYEYAOBIYEXIANGSEPUHUOLIZISEPUSHAODEDUO。SHIYONGDANJIMOSHI,ZUOWEI CE/MS DEFENLIZUJIAN、HUOZHEZUOWEIYEXIANGSEPUDEFUZHUHEZHENGJIAOFENXIJISHU。

 

 

 

 ZHUYAOWEIXIUBUJIAN:

1.GAOYADIANYUAN

BUJIANHAO:0950-2393

High Voltage Power Supply
Part Number: 0950-2393
The High Voltage Power Supply is a sealed module which contains the circuitry to
produce a maximum of ±30 kV. The supply is limited to 300 μA for safety.

2.空气过滤器,货号:3150-0619,孔径:5微米

Part Number:3150-0619 Air Filter, 5 um

皇冠篮球比分网3.LOUYECHUANGANQI DINGHUOHAO:5061-3356 CE leak sensor assembly

4.KONGQIBENG,DINGHUOHAO:G1600-67922 Airpump

5.MAOXIGUANKATAOJIMAOXIGUANKAHEBIAOQIAN

G1600-60002 Capillary Cassette
G1600-94302 Cassette Label

皇冠篮球比分网Agilent 3DCE system capillary cassette_G1600-60002 MAOXIGUANKATAO

 

NEIJINGWEI 50 μm DEBIAOZHUNMAOXIGUANDEZHUNZHIJIEKOU(BUJIANHAO G1600-60210)

 

 DAODENG

皇冠篮球比分网DINGHUOHAO:2140-0585 D2 Lamp

3
性能参数

加压系统
进样口压力在–100 到+100 mbar的范围可编程
可采用1 bar冲洗,也可用2–12 bar高压冲洗
在毛细管入口和出口端可对样品瓶加2–12 bar的高压
进样模式
自校正进样系统,可在入口端或出口端进样
编程范围: 长达10000秒
压力进样: –100 到+100 mbar
电动进样: –30 到+30 kV
自动进样器/馏分收集器
50位样品瓶盘
从毛细管入口和出口端对所有样品瓶可以随机进样

WULICANSHU

规格
宽度: 35 cm
高度: 59 cm
厚度: 51 cm
重量: 35 kg
电源要求
电源电压: 100-240 V,
最高300 W
电源频率: 50-60 Hz
接口
LAN、CAN、RS232、远程控制、
模拟信号输入(1V, 20 bit, 与A/D转
换器集成)、模拟信号输出
电泳功率
电压范围:
0 到± 30 kV 电源可设定
电流:0 - 300 μA可设定
功率:0 - 6 W可设定,恒电压、
电流和功率操作
外部水浴控温范围为10–40 °C.
(不冷凝条件下,最低水浴温度+1 °C)
补充缓冲液
为入口端和出口端样品瓶重新注入新配制的缓冲液的卫星站,实现自动
连续操作。可选择缓冲液液面高度。
样品瓶
100 μL (聚丙烯或玻璃),采用可重复密封的压盖瓶盖
1 mL (聚丙烯),采用可重复密封的压盖瓶盖
2 mL (玻璃),采用可重复密封的压盖瓶盖
毛细管卡套
采用帕尔帖元件的高速强制空气冷却器
温度范围: 室温以下10 °C,最高60 °C (卡套最低温度10 °C)
最短的毛细管总长度:33 cm
毛细管外径365 μm
检测器
实时紫外二极管阵列检测器(190–600 nm)
可控温
波长分辨率:1 nm
响应时间: 0.025 到10 s
光源: 预定位氘灯或高亮度灯
信号: 采用安捷伦化学工作站同时记录多达8个信号和采集全光谱图
灵敏度: 1 μM 4-羟基-乙酰-苯酮,进样条件50 mbar • 5 sec,
3 x 50 μm鼓泡毛细管,信噪比>6*
(20 mM 硼酸缓冲液,pH 9.3, 25 kV)
基线噪声: <50 μAU (于响应时间2 秒)*
线性动态范围: 1x104 (3 x 50 μm鼓泡毛细管)*

4
配置清单

1

G1600A 

CE1600MAOXIGUANDIANYONGYI,DAIZIDONGJINYANGQIYANGPINPING,HUANCHONGYEPING

CE1600 Capillary Electrophoresis Instrument. Installation Qualification kit, High Sensitivity Detection Cell kit and Services. 

2

Chemsation

SEPUGONGZUOZHAN

 ChemStation Edition Workstation. Software-only, withPC.

3

Diode Array Detector 

ERJIGUANZHENLIEJIANCEQI

4

M41 

ANZHUANGFEI

皇冠篮球比分网Installation Charges

5
仪器安装

YIQICHICUNYIJIZHONGLIANG

35kgZHONG

注意事项
1. 所有仪器设备必须安放在平整坚固的表面,标准高度距地面约90CM,并保证没有任何震动影响仪器的日常使用。
2. 请保证相邻的仪器设备之间存在至少10CM(4英寸)的间距,并在后部留出足够的空间(约15公分即6英寸)这样可以保证仪器设备的基本散热需要,并提供足够的日常维修维护空间。
皇冠篮球比分网 3. 请避免将仪器设备安装在温度,湿度变化比较明显的位置,比如阳光直射区域,靠近敞开窗口的区域和空调出风口附近等

 

6
操作手册

毛细管电泳标准操作规程
开机前准备:如进一个样品,取样品瓶七个,分别用记号笔标号,1.2.4.6.7.8.号,分别用移液枪加入
1号:buffer,加盖
2号:buffer,加盖
4号:缓冲溶液,加盖
5号:缓冲溶液,加盖
6号:缓冲溶液,加盖
7号:样品溶液,加盖(加样前过滤净化)
8号:空,不加盖(废液瓶)
皇冠篮球比分网 9号:空瓶,加盖(气冲洗)

(注意:各个样品瓶加样完成后超声15分钟以上,加盖,瓶盖盖严平整,3号空位,49号空位,11-48号共可装载38个样品)
打开仪器电源
打开软件,进入instrument,选择inti进行初始化
方法编辑
进入method,选择eidt entire method ,选择前两项后确认,填写实验名称并确认,设置毛细管两端与瓶底距离为4mm,设置柱温盒温度,选择inlet(进口)为4号,outlet(出口)为5号,确认。Inlet换成7号(样品),选择加压时间(即进样时间),再将7号换成5or6号。
进入Preconditioning,选择eidrt,设置1行,inlet为2号,outlet为8号,模式flush,2号,时间1min;2行flrsh,,inlet 换为1号,时间5min,3行wait,时间5min,4行flush,5号,时间20min(同次测定2,3行可省略)。
进样模式,设置进样压力50mbar,时间4sec,确认。Swith设置为on,正负调节为postive,电压值30kv,确认。设置检测波长,带宽,确认,收集为off。确认。保存方法。
样品注册,选择小瓶图标,选择sample information ,选择样品瓶号,输入样品信息,确认,
关机
进入instrument,,选择maintenance进行维护。
选择inlet,设置为2号(即水瓶),再点击蓝色气瓶图标,flash(10-20min)。
皇冠篮球比分网 选择inlet,设置为号9号,(即气冲洗瓶)再点击蓝色气瓶

ANFANGFALIZHIDINGDEWEIZHIZHIFANGDUIYINGDE,1HE2ZHINENGSHIBuffer,YANGPINFANGZAI10WEIYIHOUDEWEIZHI

JIANCEMAOXIGUANSHIFOUTONGCHANG:1HAOWEIJIASHUI,2HAOWEIJIATOUMINGKONGPING,flush 2FENZHONG,GUANCHA2HAOCHUKOUSHIFOUYOUYEDI

JIANCHASHUIJIBUFFERSHIFOUHAO

LIANGDUANJIASHANGSHUI,flushCHAHAOJIXIAN

LIANGDUANJIASHANGBUFFER,FLUSHCHAKANJIXIAN

皇冠篮球比分网BINGJIAFANGFAZHONGSHIYONGDEDIANYACHAKANJIXIAN

DUIBIJIXIAN,QUERENSHINALIBUHAO,CHUNJINGSHUIor buffer or DAODENGNENGLIANGBUZUHAISHIJIANCEQIQITADIFANG?

 

7
常见故障排除

 

毛细管电泳常见故障排除

现象

可能的原因

解决方案

电流不稳定

波动或无电流

 

 

 

 

毛细管中形成气泡

冲洗毛细管,程序升高电压以限制初始加热,和或对缓冲液脱气

毛细管堵塞

用吸收溶液(如NaOH)冲洗毛细管。当观察200nm的在线信号时.应该看到基线上有"台阶",如果仍然堵着,就用注射器或高压气体手工冲洗

毛细管断裂

更换毛细管

缓冲液瓶中没有缓冲液或者装错缓冲液

灌装/改变缓冲液瓶

大体积进样

正常情况。分祈过程中电流应该稳定。

基线不稳定

基线有毛剌

 

 

缓冲液沉淀

采用0.20.45µm的滤膜过滤缓冲液

缓冲液中有微小的气泡

用超声波或真空对缓冲液进行脱气

样品沉淀

验证样品组分在缓冲液中有足够的溶解度

基线噪声大

 

 

 

 

毛细管接口中的狭缝堵塞

用甲醇或水清洗狭缝。在放大镜下观察

氘灯老化

使用DAD测试来测定氘灯的光强度和工作时间。若必要就更换新的氘灯

数据采集速率太高

确定峰宽,需要的话降低采集速率

参比波长设置不合适

分析过程中采集1^光谱图。在不影响样品吸收的情况下 采用尽可能低的波长。并且采用宽的带宽

缓冲液在检测波长有吸收

使用UV吸收最低的缓冲液,如磷酸盐和硼酸盐,特别是在低于210nm检测时

基线飘移

 

 

毛细管准直定位不合适

重新在检测器块中安装毛细管卡套

温度未平衡

打开顶盖之后要有10-20分钟的平衡时间

氘灯刚刚开启

开启氘灯后要有15-30分钟的平衡时间

分离效率差

宽色谱峰

 

样品超载

降低样品浓度或进样量

过量的焦耳热

降低电压、缓冲液电导或毛细管内径

变形的色谱峰

 

样品和缓冲液的离子淌度不匹配

调节淌度或增大缓冲液和样品的电导差异

样品超载

降低样品浓度或进样量

峰拖尾

 

样品吸附到毛细管壁

使用叶I极值、高的缓冲液浓度、聚合物添加剂或涂层毛 细管

 

 

现象

可能的原因

解决方案

迁移时间重现性差

样品吸附到毛细管壁

缓冲液导致的EOF变化(特别是磷酸盐和表面活性剂) 或样品吸附

老化毛细管并要有足够的平衡时间。更换毛细管

管壁电荷滞后

在高(或低)PH条件下老化毛细管和使用低(或高)PH运行缓冲液引起

避免PH差异 要有足够的平衡时间

缓冲液组分变化

 

 

 

电解导致的PH变化

更新缓冲液

缓冲液挥发

扣紧缓冲液瓶盖和降低样品盘温度

再生溶液废液流进了出口缓冲液瓶

使用单独的样品瓶收集废液

再生溶液遗留在缓冲液瓶中

先将毛细管插入单独的缓冲液瓶或水瓶中

缓冲液瓶液面不一致

生成层流

使缓冲液瓶液面一致。如果不更新缓冲液,就不要使用入 口瓶冲洗毛细管

不同批次毛细管的硅羟 基含量不同

内壁电荷差异和EOF波动

测定EOF并归一化

温度变化

粘度和EOF变化

使用可控温的毛细管的系统

皡面积重现性差

突然施加高电压

缓冲液受热膨胀和样品排出

程序升高分离电压或在样品之后注射缓冲液

样品挥发

增加样品浓度和峰面积

扣紧样品瓶盖和义或降低样品盘温度

仪器局限

系统增加了进样时间的权重

增加进样时间

峰面积重现性差

样品记忆效应

外部进样

使用进样端平整光滑的毛细管。除去毛细管端口外面的聚 酰亚胺涂层

简单地将毛细管伸进样 品中引起的零进样

外部进样

不能完全消除。增大进样量以消除该效应

样品吸附到毛细管壁

峰形变差(拖尾)未洗脱样品

改变缓冲液的PH。增大缓冲液浓度 使用添加剂.比如纤维素或涂层毛细管

信噪比低

积分误差

优化积分参数。增大样品浓度。使用峰高

毛细管环境的温度变化

粘度和进样量的变化

使用可控温的毛细管的系统

8
毛细管电泳实验常见问题解答

 

毛细管电泳实验常见问题解答

目次

现象

检查

检查现象/结果

可能原因

解决方法

方案

1

无样品峰出现

检查电流是否稳定

没有电流

毛细管堵塞或断裂

用水冲洗毛细管,并观察是否有水流出,若无水流出请拆下卡盒检查毛细管两端和窗口是否断裂;毛细管没有断裂的话可以用水反向高压冲洗以试图解决此问题。缓冲溶液需要过滤,将样品过滤或者离心去除其中的颗粒。

电流波动很大,直至几乎消失

缓冲溶液中有气泡产生或者区带中样品析出

将缓冲溶液超声脱气,如果还有此现象发生,则可能是样品区带有析出,可以通过降低样品浓度/延长ramp time来试图解决这一问题;对于在缓冲溶液中溶解度不高的样品则需要在缓冲溶液中加入添加剂以解决此问题。

电流初始值较小,后逐渐增大

样品进样量过大

减少进样量,通常进样参数设置在0.5psi,5sec左右

电流正常

样品浓度过低

使用高浓度样品测试,如果无法解决则有可能是以下其他原因

检测波长设置不正确

请确认被分析物的特征吸收,检查方法中的检测波长设置

分离极性错误

对于蛋白样品,请注意蛋白在分离条件下其PI及所带电荷;对于核酸样品,通常条件下会带负电荷

样品在毛细管内壁吸附

对于蛋白及核酸样品应尽量采用涂层毛细管分离,或采用极端pH条件或动态涂层防止样品吸附。

光学检测器或光纤损坏

进行标准样品的测试,如果没有对应的结果出现,则有可能存在硬件问题,请联系工程师

检查毛细管窗口

是否有透明窗口

忘记开毛细管窗口或窗口位置不正

重新开毛细管检测窗口,或将窗口调整到正确位置

2

样品峰出现拖尾

 

 

样品在毛细管内壁吸附

对于蛋白及核酸样品应尽量采用涂层毛细管分离,或采用极端pH条件或动态涂层防止样品吸附。

3

样品峰形不对称

毛细管入口

 

毛细管入口切口不平齐

重新切割毛细管入口,注意毛细管切割方法,不可以用力过猛或反复刮擦

更改样品溶剂

 

缓冲溶液与样品溶液电解率差别过大

可采用缓冲溶液作为样品溶剂

4

样品峰过宽

降低样品进样量

有改善

样品浓度太大

可降低样品浓度或减少进样量

无改善

样品本身性质不均一

此原因主要是针对蛋白样品,小分子样品发生的概率较低

5

迁移时间不稳定

 

出峰时间不稳定且无规律

缓冲溶液与毛细管内壁平衡较慢

每次样品运行之间避免用NaOH冲洗毛细管

出峰时间依次后延

样品中有物质易发生吸附

首先在每次样品运行之前用0.1N NaOH短时间冲洗毛细管,看迁移时间能否重复,如果效果不佳请使用涂层毛细管来改善结果或者将样品再次处理,以去除样品中易吸附的组分

6

峰形和出峰时间不稳定

更换缓冲溶液种类

峰形和时间稳定

缓冲溶液不稳定,易电解,或者是样品在原缓冲溶液条件下不稳定

更换其它种类的缓冲溶液

峰形和出峰情况仍不稳定

样品中物质易在毛细管内壁吸附

可采用涂层毛细管来克服此问题,或对样品进行前处理

7

电流泄漏Current Leakage

检查毛细管是否在窗口处断裂

毛细管断裂

毛细管内缓冲溶液流出造成电流泄漏

更换新毛细管,并用水清洗光纤头及检测窗口

毛细管无断裂

实验环境湿度过大

使用抽湿机,并打开仪器Cartridge Cover;如果没有抽湿机可以使用空调,在湿度过大的情况下可在仪器关闭时放置干燥剂,但是在仪器运行时一定要将干燥剂取出

8

无法加气压

检查瓶塞是否盖紧或更换瓶塞

更换后问题解决

瓶塞老化,失去弹性

请购买新的瓶塞,并注意瓶塞不可烘干,只能自然晾干

瓶颈处有液体,导致瓶塞易滑

向瓶中装液体时不要过满,也不要沾湿瓶颈

若瓶塞无问题,可先采用真空方式,若真空方式可以使用,但压力仍不可用

压力系统问题

请联系工程师

9

迁移时间可重复但峰面积重复性不好

重新切割毛细管两端

若问题解决

毛细管入口处不平

重新切割毛细管入口,注意毛细管切割方法,不可以用力过猛或反复刮擦

问题依然存在,尝试电动进样

若电动进样可保持重现,则压力控制或气路存在问题

请联系工程师

10

毛细管或电极易折断

检查瓶盖是否老化

 

瓶盖老化

购买新的瓶盖

电极是否不垂直

电极不垂直

将电极拉直

11

冷却液泄漏

检查卡盒内垫圈和卡子

 

漏装或装错顺序

严格按照操作手册上的安装顺序安装

仪器内部管路密封不严

请联系工程师

12

PDA光强低

检测窗口Aperture型号

 

使用了窄细缝的Aperture

请在使用DAD检测器时务必使用标有8Aperture

13

谱图基线不稳定

先用0.1N NaOH冲洗毛细管,然后不进样运行原方法

基线改善

则为样品中物质有吸附

重新预处理样品或更改电泳条件

基线未改善

毛细管内有强烈吸附,或缓冲体系不稳定

更换新的毛细管,不进样,只运行缓冲,观察基线情况

更换新毛细管后基线仍然不稳,可采用Run Buffer A测试

基线改善

缓冲溶液与毛细管内壁平衡较慢

更换缓冲溶液种类,若基线变化对检测无干扰,可保持原来电泳条件

基线无改善

检测光源或其他光学器件不正常

请联系工程师

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